主要考虑是否在模板稀释过程中出现问题,是否存在高浓度样品污染低浓度样品的情况。具体的要看扩增曲线、溶解曲线以及标准曲线的结果才能判断。其次题主提到的两个问题:
模板浓度过高会抑制PCR反应,可能会导致扩增效率降低。但同时可能会出现非特异性扩增导致结果的Ct值不可信,最终导致扩增效率不可信。在一定范围内提高退火温度不会太影响扩增效率。绚丽多彩的菊花千姿百态,有的像蛟龙的爪子,张牙舞爪;有的像小姑娘的发髻,含苞欲放;有的像节日的礼花,竞相绽放,有的像害羞的小姑娘,含情脉脉……
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